更新時(shí)間(jiān):2025-08-22
| 産地 | 進口 | 加工定制 | 否 |
|---|
我們公司zui大優勢是強大的採(cǎi)購(gòu):
上海鼎桑生物科技有限公司一家專注於(yú)生命科學的科技企業,由在國内科研試劑領域有著(zhe)豐富從業經驗的技術團隊和管理團隊組建而成,專營進口生物試劑,科學儀器,實驗消耗品等。
公司将不斷把上優質的産(chǎn)品引入國内市場,滿足客戶的需求,公司也将緊跟生命科學的發展,爲廣大科研工作者探索生命科學的奧(ào)秘奉獻綿薄之力.
Polysciences全國代理-上海鼎桑
Polysciences全國代理-上海鼎桑
PEI轉染手冊
轉染操作流程:
1、細胞傳代:
轉染前24h内分離293T細胞至含10%胎牛血清的DMEM培養基 中進行傳代培養,接種密度如下:
6孔闆:0.5x106細胞
10cm培養皿:4.0x106細胞
15cm培養皿:9.0x106細胞
2、轉染
轉染前将所有試劑(jì)置於(yú)室溫。
2.1質粒DNA的稀釋
在無菌試管中,用無血清的DMEM W / O酚紅培養基(濃度爲10%)稀釋質粒DNA(ug)。病毒包裝體(psPAX2):病毒包膜(pMD2G)和重組質粒DNA的稀釋比例分别爲4:2:1。
6孔闆:200ul+3ug的DNA
10cm培養皿:1ml+7-8ug的DNA
15cm培養皿:2ml+11-12ug的DNA
2.2 轉染複合體形成
将PEI(1ug/uL)加入已稀釋的總DNA中,PEI與DNA(ug)的混合比率爲3:1。加入後立即渦旋混合。
6孔闆:9ul PEI複合體(1ug/ul)=9ug
10cm培養皿:21ul PEI複合體(1ug/ul)=21ug
15cm培養皿:33ul PEI複合體(1ug/ul)=33ug
将添加到細胞的DNA/ PEI的混合物在室溫下孵育15分鍾。
4、收獲轉染細胞
轉染後48小時内收獲轉染細胞/或病毒上清。
試劑的配制:
PEI(1ug/ul) Polysciences(CAT#23966-2配制成儲液:)
1、将無内毒素的無菌水加熱至80℃左右溶解PEI,冷卻到室溫。
2、調整pH值至7.0,用0.22um的濾器過濾消毒,分裝後儲存在-20℃。工作液可保持在4℃
訂貨信息